重生08,我被确诊为医学泰斗 - 第200章 35%(感谢niu津面的盟主)

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    35(津面的盟主!)

    学校的实验室条件没那么好。

    空调老化,地方不大,房间里人也有多。

    条件算是艰苦吧,大家却一不觉得累,一个个血沸腾的,就想着快把这个项目来。

    陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs16网吧赛。

    时过境迁。

    曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移枪的手了。

    蔡卓群将无酶,打离心,反复打。

    王晓晴观察片刻后说:“测一吧。”

    蔡卓群,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。

    用移取了1微升样本,滴在检测基座上,放检测臂,在连接的旧台式电脑上击了测量。

    屏幕上很快了数据。

    陆晓林停了手里的活,转:“多少?”

    蔡卓群:“度12ng/ul,a260/280比值是132,a260/230比值是07。”

    王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有无奈:“这已经是第四批废样了……”

    项目的难度远远超除江河外所有人的预期。

    虽然之前江河用加d的方法,解决了pcr扩增阶段引二聚的问题。

    但解决了一个问题,接来还会现更多的问题……

    现在的瓶颈,卡在了提取上。

    irna在血量极低,且非常容易被血的rna酶降解。

    纯度不够。

    a260/280的比值正常应该在18到20之间,低于18就意味着样本存在大量的白质污染。

    而a260/230比值只有07,更是说明里面混了大量的酚类质或者盐离

    用这样本去一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,后面的pcr扩增本跑不真实数据。

    蔡卓群试图寻找原因:“王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清的时候,可能还是带了一些间层的白质。”

    王晓晴摇摇:“上一批我们已经把氯仿的比例提了百分之二十,离心时间也延了五分钟,纯度是稍微好了一,但是度直接掉到了5ng/ul以。”

    陆晓林在一旁分析:“血清里全是白,游离的酸少,trizol提取法,用在血清上,天生就有缺陷。”

    实验室众人,陷沉默。

    其实在后世,有专门针对血清的提法商业试剂盒,傻瓜式作,半个小时就能得到纯度的irna。

    但在08年,专门针对活检的试剂盒在国本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。

    蔡卓群问:“王教授,有什么办法没?”

    王晓晴:“别问我,江河呢?江河去哪儿了?”

    陈浩举手:“老江说有事来着,上回来。”

    王晓晴:“那大家先停一吧,休息十分钟。”

    晓晴教授现在也是学聪明了。

    自己苦哈哈研究半天,不如江河回来一句话直接解决。

    与其浪费脑细胞,还不如休息休息,保存力……

    众人去休息时。

    易向晚和顾亦舟去给大家买

    在路上,易向晚罕见地没有开玩笑,略显忧愁的说

    “师兄,你说咱们这项目,到底能成吗?”

    顾亦舟看了他一:“怎么了?不想了?”

    “哎呀,那肯定不是啊,只是……我在想一件事嗷,退一万步讲,就算我们今天把提取纯度的问题解决了,就算接来的逆转录、pcr系全都解决了,然后呢?”

    顾亦舟皱着眉

    易向晚接着说:“我们该如何验证呢?既然是胰癌早筛,那到了最后,验证模型是否有效的话,我们需要真正的患者样本吧?”

    “而且,我们需要的是【看起来完全健康,但实际上刚患上极早期胰癌的患者的血】。”

    其实这个问题,几个心组员心里都有想过。

    只是大家都在闷活,谁也没有破。

    因为胰癌的隐蔽

    当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时,往往已经是晚期了。

    极早期胰癌,患者自没有任何症状,常规检也查不来。

    所以,想要拿到这样本,唯一的途径就是依靠完善的血清生样本库。

    就是医院期保存大量检人群的血清,几年后,当其某些人被确诊为胰癌时,研究人员再把他们几年前还是健康状态时的血清找来,用来测试江河的早筛模型,看看能不能在几年前的血里发现异常的irna升

    但现实是,08年的国,没有医院拥有如此完善的质量血清生样本库。

    协和也没有。

    “所以,如果找不到验证数据,验证数据就没意义……”

    “喝什么?”顾亦舟打断了他。

    “啊?哦,呃,可乐吧,可乐就好。”

    易向晚接过冰可乐,在自己的脖了一圈,好凉。

    而后他说:“师兄,我说这个不是打击老大的意思,我的意思是……”

    “行了,别解释了,想那么多嘛?这些问题是老大需要考虑的,我们现在的任务是把提取这关过了,别到了最后,老大从欧洲、从挪威、从国把样本找来了,结果咱们连rna都提不来,那才叫丢人。”

    “靠,也是啊!确实有想太多了……”

    两个人带着回到实验室。

    发现江河已经回来了,正站在nanodrop的屏幕前。

    而且王教授正在乖巧地汇报况:

    “纯度提不上去,trizol的局限,血清里的量远超组织,取上清的时候,不可避免地会带杂质,如果要避免带杂质,就只能取最表层的少量,但那样rna的度又达不到游pcr的要求,咋办?”

    江河淡然:“不早跟你们说过了?加糖原。”

    实验室里的人都愣了一

    老组员虽然听过江河讲这个事,但是大家都不知该怎么执行啊……

    “噢,怪我,讲的不够细。”

    江河随后解释:“在加异丙醇沉淀之前,往相里加5微升度为5g/l的糖原作为共沉淀剂,不仅能作为载帮助极微量的rna聚集沉淀,还能让最后形成的沉淀团块变得可见,方便后续洗涤,减少丢失。”

    陆晓林思考了一,提了疑问:“可是这解决不了杂质的问题啊,只要我们用移相,还是会白。”

    江河回答:“所



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