35(
谢
津面的盟主!)
学校的实验室条件没那么好。
空调老化,地方不大,房间里人也有
多。
条件算是艰苦吧,大家却一
不觉得累,一个个
血沸腾的,就想着快
把这个项目
来。
陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs16网吧赛。
时过境迁。
曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移
枪的
手了。
蔡卓群将无酶

,打
离心
底
,反复
打。
王晓晴观察片刻后说:“测一
吧。”
蔡卓群

,
枪
,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移
枪
取了1微升样本,滴在检测基座上,放
检测臂,在连接的旧台式电脑上
击了测量。
屏幕上很快
了数据。
陆晓林停
了手里的活,转
问
:“多少?”
蔡卓群:“
度12ng/ul,a260/280比值是132,a260/230比值是07。”
王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有
无奈:“这已经是第四批废样了……”
项目的难度远远超
除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加
d的方法,解决了pcr扩增阶段引
二聚
的问题。
但解决了一个问题,接
来还会
现更多的问题……
现在的瓶颈,卡在了提取上。
irna在血
的
量极低,且非常容易被血
的rna酶降解。
纯度不够。
a260/280的比值正常应该在18到20之间,低于18就意味着样本
存在大量的
白质污染。
而a260/230比值只有07,更是说明里面混了大量的酚类
质或者盐离
。
用这
样本去
一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,后面的pcr扩增
本跑不
真实数据。
蔡卓群试图寻找原因:“王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清
的时候,可能还是带
了一些
间层的
白质。”
王晓晴摇摇
:“上一批我们已经把氯仿的比例提
了百分之二十,离心时间也延
了五分钟,纯度是稍微好了一
,但是
度直接掉到了5ng/ul以
。”
陆晓林在一旁分析:“血清里全是
白,游离的
酸少,trizol提取法,用在血清上,天生就有缺陷。”
实验室众人,陷
沉默。
其实在后世,有专门针对血清的
提法商业试剂盒,傻瓜式
作,半个小时就能得到
纯度的irna。
但在08年,专门针对
活检的试剂盒在国
本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。
蔡卓群问:“王教授,有什么办法没?”
王晓晴:“别问我,江河呢?江河去哪儿了?”
陈浩举手:“老江说有
事来着,
上回来。”
王晓晴:“那大家先停一
吧,休息十分钟。”
晓晴教授现在也是学聪明了。
自己苦哈哈研究半天,不如江河回来一句话直接解决。
与其浪费脑细胞,还不如休息休息,保存
力……
众人
去休息时。
易向晚和顾亦舟去给大家买
。
在路上,易向晚罕见地没有开玩笑,略显忧愁的说
:
“师兄,你说咱们这项目,到底能成吗?”
顾亦舟看了他一
:“怎么了?不想
了?”
“哎呀,那肯定不是啊,只是……我在想一件事嗷,退一万步讲,就算我们今天把提取纯度的问题解决了,就算接
来的逆转录、pcr
系全
都解决了,然后呢?”
顾亦舟皱着眉
。
易向晚接着说:“我们该如何验证呢?既然是胰
癌早筛,那到了最后,验证模型是否有效的话,我们需要真正的患者样本吧?”
“而且,我们需要的是【看起来完全健康,但实际上刚患上极早期胰
癌的患者的血】。”
其实这个问题,几个
心组员心里都有想过。
只是大家都在闷
活,谁也没有
破。
因为胰
癌的隐蔽
极
。
当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时,往往已经是
晚期了。
极早期胰
癌,患者自
没有任何症状,常规
检也查不
来。
所以,想要拿到这
样本,唯一的途径就是依靠完善的血清生
样本库。
就是医院
期保存大量
检人群的血清,几年后,当其
某些人被确诊为胰
癌时,研究人员再把他们几年前还是健康状态时的血清找
来,用来测试江河的早筛模型,看看能不能在几年前的血
里发现异常的irna升
。
但现实是,08年的
国,没有医院拥有如此完善的
质量血清生
样本库。
协和也没有。
“所以,如果找不到验证数据,验证数据就没意义……”
“喝什么?”顾亦舟打断了他。
“啊?哦,呃,可乐吧,可乐就好。”
易向晚接过冰可乐,在自己的脖
上
了一圈,好凉。
而后他说
:“师兄,我说这个不是打击老大的意思,我的意思是……”
“行了,别解释了,想那么多
嘛?这些问题是老大需要考虑的,我们现在的任务是把提取这关过了,别到了最后,老大从欧洲、从挪威、从
国把样本找来了,结果咱们连rna都提不
来,那才叫丢人。”
“靠,也是啊!确实有
想太多了……”
两个人带着
回到实验室。
发现江河已经回来了,正站在nanodrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地汇报
况:
“纯度提不上去,trizol的局限
,血清里的
白
量远超组织,
取上清
的时候,不可避免地会带
杂质,如果要避免带
杂质,就只能
取最表层的少量
,但那样rna的
度又达不到
游pcr的要求,咋办?”
江河淡然
:“不早跟你们说过了?加糖原。”
实验室里的人都愣了一
。
老组员虽然听过江河讲这个事
,但是大家都不知

该怎么执行啊……
“噢,怪我,讲的不够细。”
江河随后解释
:“在加
异丙醇沉淀之前,往
相里加
5微升
度为5g/l的糖原作为共沉淀剂,不仅能作为载
帮助极微量的rna聚集沉淀,还能让最后形成的沉淀团块变得
可见,方便后续洗涤,减少丢失。”
陆晓林思考了一
,提
了疑问:“可是这解决不了杂质的问题啊,只要我们用移
枪
相,还是会
到
白。”
江河回答:“所
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